载体简介

（1）此载体为双基因表达载体，可以同时表达两个基因，且两个基因不会互相干扰。

（2）启动子均为强启动子，一为CMV启动子，一为hEF1α启动子。

（3）hEF1α启动子后已插入EGFP绿色荧光基因，可作为转染指示标记。 

（4）CMV启动子后可插入外源基因。MCS区可以使用的常用酶切位点已标出。

（5）此载体可作为普通真核表达载体使用，亦可作为穿梭载体包装腺病毒。相应的腺病毒包装体系其它组分产品请咨询HonorGene技术支持。

（6）此载体带有Neo抗性基因，可在真核细胞中用G418进行筛选。

测序引物

hEF1α-f：
Sequence：5'-GGTTCATTCTCAAGCCTCA-3'

CMV-f（通用引物）：
Sequence：5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'

BGH-r（通用引物）：
Sequence：5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'

Propagation in E.coli

（1）克隆菌株：DH5α、TOP10、XL1-Blue等均可。

（2）原核抗性：Kan+，工作浓度建议为25ug/ml。

（3）培养温度：37℃。

（4）质粒拷贝数（Copy number）：高（~500）。

载体验证

（1）在pHG-ads4的CMV启动子后插入DsRed-Monomer，构建pHG-ads4-moRED。

（2）将pHG-ads4-moRED转染293细胞，48h后观察荧光，可见多且亮的红色荧光和绿色荧光。

pHG-ads4是HonorGene腺病毒包装系统中最常用的一个腺病毒穿梭载体，载体为双表达框形式，采用CMV、hEF1α双启动子，hEF1α启动子后插入EGFP绿色荧光基因，CMV启动子后空着，用来插入外源基因。使用此载体，可以同时表达外源蛋白和EGFP绿色荧光蛋白，且两个蛋白的表达相对独立、互不影响。

pHG-ads4产品说明书.pdf