KM71H

Several Pichia pastoris strains are available to allow you to optimize expression and recovery of your protein of interest. Table 1 provides information to help you choose the appropriate strain.

KM71H是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。

毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。

KM71H毕赤酵母可以在YPD培养基中生长。

KM71H毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。

在筛选KM71H重组转化菌株时，Zeocin抗生素的工作浓度是100ug/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一个片段缺失，当pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C转化到KM71H中时只能产生出Mut^S转化株，不必在进行Mut基因型的筛选了。

KM71H的来源母细胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一个突变,这使得菌株无法在不含有精氨酸的培养基中生长。而KM71H酵母细胞中在AOX1基因处插入了一个正常的arg4基因，从而形成了KM71H的Mut^S， Arg⁺表型。

将约2kb的Arg4基因克隆出来后插入到KM71H来源菌株内的野生型的AOX1基因的BamH I（16bp）和Sal I（227bp）中间，从而构建成功KM71H。ARG4基因直接替换了AOX1基因的16-227片段序列。

KM71H毕赤酵母细胞的优点是不需要利用甲醇minimal media筛选菌株的Mut基因型，因为所有的转化株都是Mut^S菌株。另外，AOX1基因并没有被完全删除，理论上你可以用自己的基因替换其中的Arg4基因，从而生成Mut^S，Arg-的转化株，但是由于实验表明该基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生长，所以并不鼓励大家进行这种基因替换尝试。

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