ptfLC3（大鼠源LC3）

（1）此载体为红色、绿色双荧光标记的细胞自噬检测载体。

（2）细胞自噬定位基因为大鼠的LC3B基因。

（3）利用GFP-LC3质粒观察细胞中LC3的分布，由日本科学家首先构建和推广。但是随即他们又对其提出了质疑，因为GFP蛋白在酸性环境下绿色信号会减弱。因此，日本学者开发了一种双荧光的质粒，即ptfLC3，采取RFP和GFP两种荧光双标记。这种双标质粒的特点是：mRFP用于标记及追踪LC3，GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光发生淬灭，此时只能检测到红色荧光。在显微镜成像后，红绿荧光进行merge处理，merge后出现的黄色斑点（RFP+GFP）即只是自噬体，红色的斑点（mRFP）指示自噬溶酶体，通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱，从而实时的监测自噬发生过程。

（4）此载体的详细构建步骤及使用方法请参见文献【Dissection of the autophagosome maturation process by a novel reporter protein, tandem fluorescent-tagged LC3】，Pubmed ID号为17534139。

ptfLC3产品说明书.pdf