WB800N菌株

使用方法：

质粒转化枯草杆菌的方法有很多种，如电转化、Spizizen转化、原生质体转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基也不相同。本说明书提供一种电转化方法，供您参考。

自备试剂：LB培养基、山梨醇、甘露醇、甘油、超纯水等。

1. 准备所需试剂与耗材：

①配制40mL（LB+0.5M山梨醇）：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L，3.6g山梨醇pH=7.2。

②200 mL电转培养基（0.5M山梨醇，0.5 M甘露醇，10%甘油）：18g山梨醇，18.5g甘露醇，20 mL甘油。

③10 mL RM（0.5M山梨醇，0.38M甘露醇）：0.9g山梨醇，0.7g甘露醇。

④2个50mL离心管，灭菌。

2. 接种枯草杆菌WB800N于3 mL的LB培养基中，过夜培养。

3. 取2.6 mL过夜培养物接入40mL（LB+0.5M山梨醇）中，37℃，200rpm培养至OD600=0.85~0.95。

4. 将菌液冰水浴10分钟，然后5000g，4℃离心5分钟收集菌体。

5. 用50 mL预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5 M甘露醇，10%甘油），重新吹悬菌体，5000g，4℃离心5分钟去上清，如此漂洗4次。

6. 将洗涤后的菌体吹悬于1 mL电转培养基中，每EP管分装60μL。

7. 将60 uL感受态细胞中加入50ng DNA（1~8 uL），冰上孵育2分钟，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。电转仪设置：2.0 kv，1 mm，电击1次。（电击结果：时间常数=4.5~5.0 ms，如果时间常数<4.2，则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率。）

8. 电击完毕取出杯子并立即加入1 mL RM（LB+0.5M山梨醇+0.38 M甘露醇），37℃，200 rpm，复苏3小时后，涂板。37℃，过夜培养。

WB800N菌株产品说明书.pdf