pEE12.4

pEE系列载体是Glutamine Synthetase(GS, 谷氨酰胺合成酶)基因表达系统，利用谷氨酰胺合成酶筛选标记，能够高水平的在哺乳细胞内表达目的基因。

目前，GS（谷氨酰胺合成酶）表达系统为近年来国外最流行的表达蛋白药物或抗体的哺乳动物细胞高效表达系统。

GS酶是生物体内以谷氨酸和氨为底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能够被甲硫氨酸砜亚胺（methionine sulphoximine，MSX）选择性的抑制。

一些哺乳动物细胞，例如小鼠骨髓瘤细胞(NSO细胞系)无法表达GS，所以在不添加谷氨酰胺的情况下，细胞将无法生长。

对于这些细胞系，在无谷氨酰胺的培养基内，一个转染的GS基因可以作为一个筛选标记。其他的一些细胞系，例如CHO-KI，能够产生内源性的GS酶。

对于这些细胞，在无谷氨酰胺培养基内，在高水平足够抑制GS酶合成的MSX（甲硫氨酸砜亚胺）的作用下，可以对细胞的生长提供一个选择压力。

pEE12.4(主)或者pXC17.4，提供含有复制子、原核抗性、GS抗性等主要骨架。如果表达的抗体是单链，则只需要这个主要载体就可以。

pEE6.4(辅助)或者pXC18.4，只是提供抗体轻链的：启动子-内含子-抗体轻链CDS-转录终止区域（已标记）。

如果要同时表达重链和轻链，就分别把重链和轻链片段构建到pEE12.4和pEE6.4载体上，获得pEE12.4-重链、pEE6.4-轻链质粒。

然后把pEE6.4-轻链质粒上的表达框酶切下来（NotI+SalI），构建到pEE12.4-重链质粒上，形成一个双表达框结构的重组质粒（pEE12.4-重链-轻链），就可以同时表达重链和轻链。

pEE12.4产品说明书.pdf

pEE12.4质粒序列.txt