MV-4-11+luc人髓性单核细胞白血病细胞荧光素酶标记细胞

细胞描述：

      MV-4-11细胞系由Rovera课题组建立，来源于一名患有人双表型髓性单核细胞白血病（biphenotypic B myelomonocytic leukemia）的10岁男孩的外周血。Interleukin (IL)-3可以独立地支持该细胞长期生长，使用10%FBS培养时则不需要额外添加IL-3。但是，在IL-3和生长因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor（GM-CSF）均处于低浓度的情况下，IL-3会抑制MV-4-11细胞的增殖。

生长因子Granulocyte Colony Stimulating Factor（G-CSF）会协同GM-CSF促进MV-4-11细胞的增殖，而单独的G-CSF会短暂刺激该细胞系。据文献[PubMed: 3500218]报道，间接免疫荧光法检测髓性单核细胞抗原CD15，超过96%的该细胞为阳性，40~96%为单核细胞抗原CD4阳性，4-11%为单核细胞抗原CD10阳性。

     该细胞为MV-4-11细胞通过慢病毒转染的方式携带luc基因。

     细胞为稳定转染Luc的细胞，随细胞传代次数的增加，其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。

细胞特性：

1） 来源：男性，10岁 外周血

2） 形态：成淋巴细胞状，悬浮生长

3） 规格：1×106cells

4） 培养条件：IMDM+10%FBS（特级胎牛血清）+1%P/S (推荐货号AW-MCH478)

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

5） 【注意事项】：  

a）该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。同时，您在收到T25培养瓶发货的细胞后， 可以通过离心（1000rpm， 5min）离心收集细胞后， 添加8-10ml 按照要求配置的新鲜培养液，  然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。

 后续建议您使用【半换液法】进行传代。

b) 细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。
c) 该细胞对细胞密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围。细胞接种密度20万个/mL ，培养时维持细胞密度在10万-100万个/mL供应限制

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、 细胞复苏

1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代

1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。