THLE-2 人正常肝细胞

细胞描述：

    THLE-2细胞是一种从供体左叶组织中分离出来的上皮细胞。THLE-2 ( ATCC CRL-2706和 THLE-3 ( ATCC CRL-11233 ) 细胞系是通过感染 SV40 大 T 抗原从原代正常肝细胞中获得的, 均表现出正常成年肝上皮细胞的表型特征：当将这些细胞注射到无胸腺裸鼠体内时，它们不会引发肿瘤；它们的核型接近二倍体，且不表达甲胎蛋白。[RF84750] 这两种细胞能够将苯并[a]芘、N-亚硝基二甲胺以及黄曲霉毒素B1代谢为具有致癌作用的最终代谢物，这些代谢物会与DNA发生结合，这一现象说明它们具备细胞色素P450代谢途径的相关功能。

细胞特性：

1） 来源：人，肝

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 规格：1×106cells

4） 培养条件： 基础培养基+1%细胞添加剂+1%ITS (胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂)+10%胎牛血清+1%双抗 （推荐培养基：AW-MNH789）

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

5）备注：  

      1、该细胞生长缓慢，培养周期2-3周左右；

      2、另外 该细胞较难培养，细胞较难贴壁建议使用Corning的cellbind细胞培养瓶,货号是3289来进行培养细胞。

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、 细胞复苏

1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代

1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。