HAP1 人慢性髓性白血病细胞（STR鉴定）

细胞描述：

     HAP1细胞来源一位40岁成人男性患有慢性髓性白血病BCR-ABL1 阳性的患者原位骨髓分离建系的细胞系。该细胞于CVCL_A426（KBM-7)同源。染色体信息: 已失去父细胞系KBM-7的第二个8号染色体拷贝。保留了15号染色体片段与19号染色体融合的第二个拷贝。

细胞特性：

1） 来源：人，男性，40岁，髓性白血病

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 规格：1×106cells

4） 培养条件：IMDM培养基+10%优质胎牛血清+1%双抗 (推荐货号AW-MC009)

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考

1、 细胞复苏

    1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

    2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

    3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

    4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代（悬浮细胞不用胰酶消化的过程，直接进行离心收集细胞沉淀或者半量换液）

    1） 待细胞生长到80% -90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入 1ml    0.25%胰酶，消化 （10s~2min不等，不同细胞消化时间不同，以细胞收缩变圆为准，第一次消化，建议镜下实时观察消化，以确定您实验室对该细胞消化的最优条件 ，避免消化过度）；

    2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

    3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

     3、细胞冻存

    1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

    2） 用预冷的1ml冻存液（90% 完全培养基+10% DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

    3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。