alpha TC1 clone 6(αTC1-6)小鼠胰腺细胞(种属鉴定)
细胞描述:
lpha TC1 clone 6是1988年从患有腺瘤的小鼠胰腺中分离出来的α细胞系。它是从表达SV40大T抗原癌基因的转基因小鼠在大鼠胰高血糖素前原启动子控制下产生的腺瘤中克隆出来的。alpha TC1 clone 6是一株胰腺Alpha细胞株。 它从alpha TC1细胞株克隆而来,而alpha TC1细胞株是从转染了大鼠前高血糖素原启动子控制下的SV40大T抗原抗癌基因的转基因小鼠中产生的腺癌中得到的。 其亲本细胞株是低分化的,既产生高血糖素又产生胰岛素。 两个克隆细胞株,alpha TC1 clone 6和alpha TC1 clone 9 分化程度较高并且只产生高血糖素。 Alpha TC1 clone 6表现的分化程度最高,表达的高血糖素水平也最高。 .The alpha TC1 clone 6对研究胰岛的许多生物学特性包括高血糖素的生物合成及细胞分裂素类敏感性都很有用。
细胞特性:
1) 来源:小鼠,胰腺
2) 形态:上皮细胞, 贴壁生长;松散连接的簇群和悬浮的单细胞。
3) 规格:1×106cells
4) 培养条件:MEM培养基+10%优质胎牛血清+1%双抗 (推荐货号AW-MC003)
空气,95%;二氧化碳,5%
37℃
5) 特殊说明:
A:该细胞不能用胰蛋白酶消化,细胞消化需用细胞解离缓冲液(Invitrogen, Catalog No. 13150-016或者用 AW-C016)消化2-3分钟。
B:细胞为松散的连接簇群细胞团和悬浮细胞两种细胞形态生长,80%密度即可传代
特殊说明:
培养细胞的过程中细胞会发生堆叠和松散贴壁的细胞团这是正常的。需要2-3天对细胞进行一次换液以保证细胞的正常生长。该细胞贴壁较慢,复苏细胞后48h内尽量不要移动细胞让细胞达到最佳的贴壁状态。生长过程中会悬浮细胞出现,在换液和传代过程中需要离心回收悬浮的细胞。丢弃悬浮的细胞会使细胞的密度变低,这个细胞在培养过程中不会达到100%的融合。细胞生长过密会引起贴壁的细胞变成悬浮的状态。明胶或多聚赖氨酸包被的培养瓶可以使细胞更好的贴壁。
细胞接收后的处理:
1) 收到细胞后,活细胞首先观察培养瓶是否完好,培养液是否漏液,培养基是否浑浊;冻存细胞是否干冰已挥发完,冻存管盖是否脱落,破碎,若有这类情况,请务必拍照记录,并于收货24h内与我们联系。
2) 细胞处理:
复苏的细胞:如果是T-25培养瓶活细胞,收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理,然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。
备注:运输用的培养基不宜再次用来培养细胞,请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。
冻存细胞:如果是干冰运输的冻存细胞,收到后请立即转入液氮存储或者短暂(24h)放置-80度冰箱保存,或者直接进行细胞复苏。
细胞复苏、传代及冻存流程参考:
1、 细胞复苏
1) 配制完全培养基:基础培养基+胎牛血清+双抗(特殊培养基特殊配置);
2) 细胞复苏:取5ml完全培养基于15ml离心管中,37℃水浴锅预热,从液氮管(或者-80度冰箱)中快速取出冻存的细胞,放入37℃水浴锅中,摇晃使快速化冻(1min左右),然后将化冻的细胞和预热的培养基,移入超净工作台中,化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3) 吸弃上清,得到细胞沉淀,用2ml完全培养基轻轻重悬细胞,加入到T25培养瓶中,做好标记,放入37℃,5%CO2饱和适度培养箱中培养(培养皿复苏效果更好);
4) 24h后,观察细胞贴壁情况(未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞),吸弃旧培养基,加入新鲜的预热(室温或37℃)的完全培养基,继续培养。
2、 细胞传代
1) 待细胞生长到80%-90%汇合度时,吸弃旧的培养基,加入1ml无菌PBS润洗一次,以去除残余的培养基及血清(血清含有胰酶的抑制因子),然后加入1ml 0.25%胰酶,37℃培养箱中消化(1~2min左右,不同细胞消化时间不同),取出细胞,镜下观察细胞至细胞皱缩变圆;
2) 加入1ml完全培养基(含FBS)终止消化,轻轻拍打,使细胞脱落下来成单个细胞悬液,收集细胞于15ml无菌离心管中,1000rpm,离心5min;
3) 收集细胞沉淀,完全培养基重悬,一分为二(可根据细胞生长速度调整比例),分别加入到2个新的培养瓶中,做好标记,放入培养箱中培养。
3、细胞冻存
1) 按照细胞传代方法,在超净工作台内消化收集细胞沉淀,取少量细胞用于计数;
2) 用预冷的1ml冻存液(90%完全培养基+10%DMSO)或者无血清细胞冻存液重悬细胞,加入到1.2ml冻存管中,密度为1*106个/ml。
3) 放入程序冻存盒,-80℃过夜后,转入液氮长期保存。

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