KASUMI-1 (人红白血病细胞)(STR鉴定)

细胞描述：

Kasumi-1细胞具有人急性淋巴白血病细胞的典型特征，是研究人急性淋巴白血病的极佳材料。Kasumi-1细胞是一个带有8:21号染色体转位的白血病细胞株，这个转位使得AML1基因和ETO(或称MTG8)基因串联，使融合基因AML1-ETO(也称作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表达升高，因而细胞产生嵌合的AML1-ETO蛋白。这个蛋白下调CEBPA mRNA、蛋白和DNA的结合活性，而这种结合对粒性白细胞的分化是极端重要的。Kasumi-1细胞建立于一位急性白血病患者的外周血，Kasumi-1细胞髓过氧化物酶阳性，显示其髓性成熟的形态。增生试验显示，培养的Kasumi-1细胞对IL-3、IL-6、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、GM-CS(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)有响应，但对IL-1和IL-5没有响应。在体外液体培养中分别加入二甲亚砜、G-CSF、IL-5，也没有观察到粒性或嗜酸性细胞的成熟。Kasumi-1细胞培养过程中，加入佛波酯可以看到诱导出的巨噬细胞样细胞。

细胞特性：

1） 来源：外周血，急性原粒细胞白血病

2） 形态：原粒细胞，悬浮生长

3） 规格：1×10⁶cells

4） 培养条件：1640+20%FBS+ 1%P/S (推荐货号AW-MC029)

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

特殊说明：

1．该细胞复苏后成活率较低，会出现大量死细胞和死细胞碎片，培养两周后有所好转。建议每1-2周对细胞进行1000rpm，5mins离心，弃掉上清，加入新鲜完全培养液，可以去掉部分细胞碎片和颗粒。培养过程中会出现死细胞和细胞碎片，收到邮寄的活细胞的用户若发现培养物内有部分死细胞和细胞碎片，此为正常现象。

2．细胞培养过程中会有轻微聚团，轻轻吹打开即可。当细胞密度较大或者培养液变黄时，需要及时进行半换液或者完全换液。

3．该细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。

4．请注意保持细胞密度在合适的范围（3×10⁵~3×10⁶/ml），不能过稀。

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、 细胞复苏

1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO₂饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代

1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*10⁶个/ml。

3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。