Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)（STR鉴定）

细胞描述：

Caco-2细胞分离自直肠原位癌，适于转染；当长到满时，Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白Ⅱ，并呈角质蛋白阳性。

细胞特性：

1） 来源：人；白人， 男性，72岁， 结肠

2） 形态：贴壁生长；细胞形态不均一，有部分含有液泡的巨大细胞

3） 规格：1×10⁶cells

4） 培养条件： MEM（含NEAA）+10%FBS+1%P/S  （推荐培养基：AW-MC003）

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

5） 备注说明：

A该细胞贴壁较慢， 特别是刚复苏时，  一般需要2-3天才贴壁展开，请耐心等一等。   展开后会有空泡，是正常现象。

B细胞在传代时 ，注意消化吹打消散成单个细胞， 不然成团的细胞较难贴壁。

C该细胞属于成片生长， 细胞密度越大， 表面空泡黑点越多，也属于正常现象。

D细胞长至80%就需要传代，基本上不会长满， 因为是成片生长的，所以此时细胞密度已经很大了，请及时传代处理。

E细胞生长太满对细胞影响较大， 易出现破碎，死亡的情况； 且细胞生长越久，消化难度随之增加。

消化到轻拍培养瓶侧边，细胞可以滑落的情况，即终止消化。

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、 细胞复苏

1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO₂饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代

1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*10⁶个/ml。

3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。