成脂诱导分化培养基

成脂诱导分化培养基

产品简介：

本产品专门为干细胞成脂诱导分化而开发，针对不同类型的间充质干细胞的特性优化分化试剂的配方。本产品经过实验测试，可以用于不同类型间充质干细胞，前体脂肪细胞以及3T3-L1(小鼠胚胎成纤维细胞) 的成脂诱导。

本产品含血清成分，仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床及其他用途。

产品规格组成：

成脂诱导分化培养基A液：

成脂诱导维持培养基B液：

注意：

1.为保证产品的有效性，请不要反复冻融。

2.配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为1个月，请根据实验用量合理配制。

产品使用方法：

一、成脂诱导分化培养基配制

1、本产品为试剂盒型，使用前需将试剂盒内各成分试剂混匀。（请勿将A液与B液混淆）

2、使用前，请将血清（FBS）置于4℃化冻，直至血清完全溶解；待血清完全溶解后，将所有添加物于室温溶解。待试剂完全溶解后，将试剂加入到对应培养基中

注：（1）为了保证微量试剂的使用效果，添加试剂前请将试剂管进行短暂离心，使试剂能全部收集至管底。

    （2）无菌吸取试剂管中的试剂成分，将枪头伸至培养基液面下方注入，轻微吹打洗涤枪头。再吸取少量培养基洗涤试剂管，尽可能将所有组分完整地加到基础培养基中，保证培养基的效果。

   （3）试剂配制应全程在无菌操作台进行。

二、成脂诱导分化细胞准备（以大鼠骨髓间充质干细胞，六孔板培养为例）

1、间充质干细胞的融合度达到 80~90%时，用0.25%胰酶进行消化，注意干细胞生长密度不宜过大，易成片脱落。

2.将消化下来间充质干细胞进行计数，根据计数结果，按 2~3×104 cells/cm2 的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入 2 mL 的间充质干细胞完全培养基，置于37℃，5% CO2 的培养箱中进行培养。

4. 当细胞融合度达到 100%时（细胞过饱和有利于激发干细胞的成脂潜能），小心的将孔内完全培养基吸走，向六孔板中加入 2 mL  成脂诱导分化培养基A液（为防止细胞诱导过程因细胞密度过大出现细胞回缩或漂浮现象，建议铺板前用明胶包被六孔板过夜后使用）。

5. 诱导3天后，吸走六孔板的诱导完全培养基，每孔加入 2 mL 成脂诱导分化培养基B液。

6. 成脂诱导分化培养基B液诱导一天后，吸走B液，更换为成脂诱导分化培养基A液，继续进行诱导3天。                                                                                                                    

7. A、B 两种培养基交替诱导3~5 次后，当观察到干细胞内出现明显的、足够多的脂滴后，即可结束诱导，根据实验需求对细胞进行染色和后续鉴定。

三、油红O染色

1. 成脂诱导实验结束后，可进行油红O染色确定诱导效果。

2. 吸走孔板里的成脂诱导分化完全培养基，用 1×PBS 润洗 1~2 遍。

3. 加入4%多聚甲醛溶液（覆盖细胞表面即可），对细胞固定 30 分钟。

4. 细胞固定期间，可配制油红O 工作液（饱和油红 O 溶液：蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤或1500rpm离心去掉残渣）。

5. 吸走4%多聚甲醛溶液，用 1×PBS 润洗 1~2 遍。

6. 以六孔板为例，每孔加入 1mL 油红 O 工作液，室温染色 30 分钟。

7. 吸走油红 O 工作液，用清水润洗至背景杂质洗干净，即可在显微镜下观察诱导和染色效果。（为保证实验效果，建议油红O不要重复使用）