Toledo 人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞（STR鉴定）

细胞描述：

      Toledo 人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞 是1990年从患有弥漫性大细胞淋巴瘤(非霍奇金B细胞)的成年白人女性患者的外周血中分离的B淋巴细胞系。经过大剂量化疗和骨髓移植后，患者随后出现脑部淋巴瘤。尽管细胞的形态类似于伯基特淋巴瘤，但细胞缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色体易位。核型确实表现出多种染色体畸变。细胞不表达表面或细胞质免疫球蛋白。这些细胞对 Epstein-Barr 病毒呈阴性。

细胞特性：

1） 来源：白人，女性， 外周血分离的B淋巴细胞

2） 形态：淋巴母细胞样，悬浮生长

3） 规格：1×106cells

4） 培养条件：1640+10%FBS+1%P/S (推荐货号AW-MC002)

                       空气，95%；二氧化碳，5%

                       37℃

5） 注意： 

   细胞对培养基PH值要求较高， 避免培养基碱度过高 。 加入培养基之前， 先将含有完全生长培养基的培养容器放入培养箱中至少 15 分钟，以使培养基达到正常 pH 值（7.0 至 7.6），再加入细胞进行培养。 

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2） 细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考：

1、 细胞复苏

1） 配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3） 吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4） 24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、 细胞传代

1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3） 收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1） 按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

3） 放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。